一、禽白血病病毒抗原ELISA批量凈化檢測試劑盒原理

本試劑盒采用直接競爭ELISA方法批量檢測禽白血病病毒抗原。

二、用途

批量檢測蛋清、泄殖腔式子、肝臟、病毒培養(yǎng)液等一批中禽白血病病毒，檢測結(jié)果可用于ALV感染的輔助診斷。

三、禽白血病病毒抗原ELISA批量凈化檢測試劑盒所需材料

儀器：微孔板酶標(biāo)儀450 nm/630 nm、振蕩器、離心機(jī)、、離心管（5 mL, 50 mL）

微量移液器：單道 1µL～10 µL、10 µL～100µL

多道 50µL～300µL

試劑：去離子水

五、 試劑盒組成

六、溶液配制

配液1: 洗滌工作液

  用去離子水將20×濃縮洗滌液按1 : 19體積比進(jìn)行稀釋，用于酶標(biāo)板的洗滌，洗滌工作液在4℃環(huán)境可保存一個月，用前一天取出回溫。

配液2: 1 ×樣品稀釋液      

  用去離子水將2 ×樣品稀釋液按1:1體積比進(jìn)行稀釋。配好的1 ×樣品稀釋液在4℃環(huán)境可保存一個月，用前一天取出回溫。

七、樣本前處理                                                  

樣本處理前須知：

① 處理完的樣品應(yīng)及時進(jìn)行下步檢測，實驗中必須使用一次性吸頭，吸取不同試劑時要更換吸頭。

② 樣本數(shù)目超過8個時推薦使用排槍加樣。

樣本處理：

①蛋清取全蛋，破碎后取蛋清，,置-20℃以下凍融1次，用微量移液器吸取蛋清直接進(jìn)行檢測。

②泄殖腔拭子用無菌棉簽于待檢雞只泄殖腔取樣后，放入0.5ml 1×樣品稀釋液中，置-20℃以下凍融1次，劇烈震蕩1分鐘，擠出棉簽中的液體，棄棉簽。以5000r/min離心5分鐘，取上清直接進(jìn)行檢測。

③病毒培養(yǎng)液，取病毒培養(yǎng)液以8000r/min離心10分鐘，取上清直接進(jìn)行檢測。

④肝臟等組織，取約2g加入0.5ml 1×樣品稀釋液，研磨破碎，置-20℃以下凍融1次，以5000r/min離心5分鐘，取上清直接進(jìn)行檢測。

八、 酶標(biāo)免疫測定程序

①將所有所需試劑從冷藏環(huán)境中取出，待其*回升至室溫(20~25℃)后方可使用。注意每種液體試劑使用前均須搖勻。

② 按陽性對照和樣品雙孔平行的數(shù)量使用微孔。

包被板上對照品和待測樣品添加如下所示：

(注：P表示陽性對照品;N表示陰性對照品；S1、S2、S3、S4等表示待檢樣品)

③加入處理好的待檢樣品，100µL/孔，同時設(shè)陰、陽性對照品（各2孔），輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置37℃避光環(huán)境中反應(yīng)30min。

④洗板：小心揭開蓋板膜，將孔內(nèi)液體甩干，加入洗滌工作液300 µL/孔，每次靜置20s，甩去孔內(nèi)液體，重復(fù)洗滌3次，最后一次用吸水紙拍干（拍干后未被清除的氣泡可用未使用過的槍頭戳破）。

⑤加酶標(biāo)物：加入酶標(biāo)物100 µL/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置37℃避光孵育30 min。

⑥.甩干孔內(nèi)液體，重復(fù)洗板3次，最后一次用吸水紙拍干。

⑦顯色：加入底物液A液50 µL/孔，再加底物液B液50 µL/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置37℃避光環(huán)境中反應(yīng)10min。

⑧測定：加入終止液50µL/孔，用酶標(biāo)儀立即  測定450nm處的吸光度值。

九、 結(jié)果判定

① 試驗結(jié)果滿足有效的前提條件是：陽性對照品孔的平均OD_450nm值>0.20，陰性對照品孔的平均OD_450nm值<0.10。

② S/P=   被檢測樣品平均OD_450nm/ 陽性對照品孔的平均OD_450nm值

S/P ≥0.2時，判定為陽性樣品，數(shù)值越大，陽性越強(qiáng)；被檢測樣品0.1≦ S/P <0.2時，判定為可疑樣品，建議一周后重測； 被檢測樣品OD_450nm值<0.1時為陰性樣品。

十、 注意事項

① 本品僅供體外檢測使用。

② 樣本前處理完畢后以及洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。

③ 反應(yīng)終止液為2M硫酸，避免接觸皮膚。

④不使用過了有效期的試劑盒，不交換使用不同批號的試劑。試劑盒中的各種液體試劑使用前應(yīng)充分搖勻，平衡至室溫。

⑤包被板拆封后未使用，應(yīng)放回鋁箔袋并封口，2～8℃保存，應(yīng)避免受潮，試劑盒使用完畢后應(yīng)在2～8℃下保存。

⑥應(yīng)嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作，嚴(yán)格遵循各操作步驟規(guī)定的時間和溫度。

⑦未提及問題請致電本公司技術(shù)服務(wù)部。

十一、貯藏條件及保存期

   貯藏條件： 2～8℃

保 質(zhì) 期： 6個月

僅供獸醫(yī)診斷使用

長期提供原核、真核蛋白表達(dá)構(gòu)建服務(wù)

長期 提供抗原偶聯(lián)、 HRP、生物素、糖基化、親和素、FITC等偶聯(lián)標(biāo)記多肽、抗體、抗原、蛋白等服務(wù)